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Analyse des tumorrelevanten proteins survivin : molekulare charakterisierung der dimerisierung

Author: Cecilia Vallet; Shirley Knauer
Publisher: Wiesbaden, Germany : Springer Spektrum, 2015. ©2015
Series: BestMasters.
Edition/Format:   eBook : Document : GermanView all editions and formats
Summary:
Cecilia Vallet untersucht, wie der Wechsel zwischen der monomeren und der dimeren Form des Proteins Survivin reguliert ist. Survivin ist in nahezu allen malignen Tumorerkrankungen überexprimiert und durch seine Rolle als Zellzyklus-Regulator und Apoptose-Inhibitor an zwei entscheidenden Prozessen der Onkogenese beteiligt. Es wird angenommen, dass Survivin im Rahmen seiner Funktionen als Zellzyklus-Regulator und  Read more...
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Details

Genre/Form: Electronic books
Additional Physical Format: Print version:
Vallet, Cecilia.
Analyse des tumorrelevanten proteins survivin : molekulare charakterisierung der dimerisierung.
Wiesbaden, Germany : Springer Spektrum, ©2015
xxiii, 100 pages
Material Type: Document, Internet resource
Document Type: Internet Resource, Computer File
All Authors / Contributors: Cecilia Vallet; Shirley Knauer
ISBN: 9783658085414 365808541X
OCLC Number: 903954409
Description: 1 online resource (121 pages) : illustrations.
Contents: Geleitwort; Institutsprofil; Vorwort; Inhaltsverzeichnis; Abkürzungsverzeichnis; Abbildungsverzeichnis; Tabellenverzeichnis; Symbole für die proteinogenen Aminosäuren; 1 Einleitung; 1.1 Krebs; 1.2 Apoptose; 1.3 Zellzyklus; 1.4 Kerntransport; 1.5 Survivin; 1.6 Zielsetzung; 2 Material; 2.1 Geräte; 2.2 Verbrauchsmaterialien; 2.3 Chemikalien; 2.4 Puffer und Lösungen; 2.5 Antibiotika; 2.6 Bakterienstämme; 2.7 Zelllinien; 2.8 Nährmedien und Medienzusätze; 2.9 Plasmide; 2.10 Primer; 2.11 Enzyme; 2.12 Antikörper; 2.13 Größenstandards; 2.14 Kits; 2.15 Software; 3 Methoden. 3.1 Molekularbiologische Methoden3.1.1 Polymerasekettenreaktion; 3.1.2 Splice Overlap Extension PCR (SOE-PCR); 3.1.3 Agarose-Gelelektrophorese; 3.1.4 Reinigung von PCR-Produkten; 3.1.5 DNA-Extraktion aus Agarose-Gelen; 3.1.6 Restriktionsverdau; 3.1.7 Ligation; 3.1.8 Photometrische Bestimmung der DNA-Konzentration; 3.1.9 Sequenzanalyse; 3.2 Mikrobiologische Methoden; 3.2.1 Transformation chemisch kompetenter E. coli Bakterien; 3.2.2 Langfristige Lagerung transformierter E. coli Bakterien; 3.2.3 Expression rekombinanter Proteine in E. coli Bakterien. 3.2.4 Plasmidisolierung aus E. coli Bakterien3.3 Proteinbiochemische Methoden; 3.3.1 Reinigung von rekombinanten GST-Fusionsproteinen; 3.3.2 Bestimmung der Proteinkonzentration; 3.3.3 SDS-Gelelektrophorese; 3.3.4 Coomassie-Färbung; 3.3.5 Western Blotting; 3.3.6 Gelfiltration; 3.3.7 CD-Spektroskopie; 3.4 Zellbiologische Methoden; 3.4.1 Kultivierung eukaryotischer Zellen; 3.4.2 Zellpassage; 3.4.3 Transiente Transfektion eukaryotischer Zellen; 3.4.4 Herstellung von Zelllysaten; 3.5 Fluoreszenzmikroskopische Methoden; 3.5.1 Konfokale Fluoreszenzmikroskopie. 3.5.2 Föster-Resonanz-Energie-Transfer (FRET)4 Ergebnisse; 4.1 Auswirkungen der Acetylierung an Lysin 129 auf die Dimerisierung von Survivin; 4.1.1 Testexpression der Acetylierungs-Mutanten in E. coli SoluBL21 Bakterien; 4.1.2 Herstellung der Acetylierungs-Mutanten in E. coli SoluBL21 Bakterien; 4.1.3 Analyse der Acetylierungs-Mutanten mittels Gelfiltration; 4.2 Einfluss des nukleären Exportsignals (NES) auf die Dimerisierung von Survivin; 4.2.1 Herstellung der NES-Mutanten in E. coli SoluBL21 Bakterien; 4.2.2 Analyse der NES-Mutanten mittels Gelfiltration. 4.2.3 CD-spektroskopische Analyse der NES-Mutanten4.3 Effekt des Survivin-Antagonisten S12 auf die Dimerisierung von Survivin; 4.4 Etablierung eines FRET-Assays zur Analyse derDimerisierung von Survivin in vivo; 4.4.1 Analyse der Expression der FRET-Konstrukte im eukaryotischen System; 4.4.2 Testtransfektion der FRET-Konstrukte; 4.4.3 Sensitized Emission FRET-Assay; 5 Diskussion; 5.1 Auswirkungen der Acetylierung an Lysin 129 auf die Dimerisierung von Survivin; 5.2 Einfluss des nukleären Exportsignals (NES) auf die Dimerisierung von Survivin.
Series Title: BestMasters.
Responsibility: Cecilia Vallet ; mit einem geleitwort von Prof. Dr. Shirley Knauer.

Abstract:

Cecilia Vallet untersucht, wie der Wechsel zwischen der monomeren und der dimeren Form des Proteins Survivin reguliert ist. Survivin ist in nahezu allen malignen Tumorerkrankungen überexprimiert und durch seine Rolle als Zellzyklus-Regulator und Apoptose-Inhibitor an zwei entscheidenden Prozessen der Onkogenese beteiligt. Es wird angenommen, dass Survivin im Rahmen seiner Funktionen als Zellzyklus-Regulator und Apoptose-Inhibitor als Monomer agiert, wohingegen es in Lösung als Homodimer vorliegt.

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