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La structure cristalline d'une forme longue tRNase Z de la levure et l'étude de son interactome

Trz1 chez levure est responsable du clivage endonucléolytique à l'extrémité 3 'au cours du processus de maturation des ARNt. Trz1 appartient à la famille des RNases de type b-lactamase, caractérisé par la présence d'un motif de séquence HxHxDH qui est impliqué dans la fixation des ions de zinc catalytique. La famille des RNaseZ est partagée en deux sous-familles de longueur de séquence différente: les formes courtes (300-400 acides aminés) et les formes longues (700-900 acides aminés). Les structures cristallines des enzymes RNaseZ de forme courte ont montré qu'ils sont actifs comme des homodimères. Une sous-unité englobe les ARNt substrat en utilisant un bras en saillie et l'autre fournit le site catalytique. Nous présentons ici la structure cristalline de Trz1, la première pour une RNase Z de forme longue. Trz1 est organisé en deux domaines reliés par un long peptide charnière. Chaque domaine est composé d'un repliement de type β-lactamase. Le domaine N-terminal a perdu ses résidus catalytiques au cours de l'évolution, mais il contient le bras long qui est important pour la liaison de l'ARNt; tandis que c'est l'inverse pour le domaine C-terminal. À partir des études protéomiques, on sait que Trz1 forme un complexe ternaire avec NUC1, une nucléase mitochondriale impliquée dans l'apoptose, et avec une mutarotase (codée par YMR099C). Nous avons purifié le complexe ternaire Trz1/NUC1/mutarotase caractérisé ses propriétés biochimiques. Trz1/NUC1/mutarotase forme in vitro un heterohexamère très stable en solution. A partir de nos données SAXS et MALLS nous proposons que l'homodimère NUC1 est au centre du complexe et que chaque sous-unité interagit avec une copie de Trz1 et une copie de mutarotase
Computer Program, English, 2016